La somministrazione dell’alimento fortificato avverrà seguendo lo schema di uno studio di coorte associato ad uno studio trasversale prospettico (Clarke et al 2002, Heaney et al 2012, Chowdhury et al 2012) saranno analizzati 50 soggetti e 50 controlli omogenei per età e sesso. L’analisi dei parametri avverrà all’inizio dello studio, dopo 60 giorni e dopo 90. Assumendo il tempo zero all’inizio dell’integrazione, tempo 60 giorni la fine dall’integrazione e tempo 90 giorni per appurare come la situazione possa essere variata dopo un certo lasso di tempo dalla fine dell’integrazione.
Al momento dell’arruolamento, ai soggetti verrà fatto firmare un consenso informato in accordo alle leggi vigenti, lo studio sarà approvato dal comitato etico del Policlinico Universitario di Palermo. Con questo tipo di studio si possono analizzare contemporaneamente più parametri che sono poco soggetti a distorsioni (bias).
I soggetti saranno stati sottoposti a prelievo ematico ed urinario a tempo zero (prima dell’assunzione dell’integratore), dopo 2 mesi (dall’assunzione dell’integratore) e dopo 3 mesi. La popolazione sarà stratificata per età, genere, assenza di patologie rilevanti e BMI>25.
Su ciascun campione saranno effettuate le seguenti analisi:
– Emocromo con formula;
– Chimica clinica (glicemia, AST, ALT, uricemia, colesterolo totale, HDL, LDL, proteine totali, creatinina, gammaGT), inoltre per gli uomini PSA e testosterone;
– LDL ossidate con saggio ELISA;
– AGE, con saggio ELISA;
– Analisi dei minerali tramite gas-cromatografia e cromatografia liquida associata aspettrometria di massa (ICP-MS ThermoScientificXSeriesII, Thermo Fisher Scientific, Bremen, Germany).
I test per gli AGE (OxiSelect™ Advanced Glycation End Products (AGE) ELISA, Cell BiolabsInc.) e per le LDL-ox (OxiSelect™ Human Oxidized LDL ELISA Kit (MDA-LDL Quantitation, Cell BiolabsInc.) sono test ELISA colorimetrici la cui lettura viene fatta a 450 nm mediante spettrofotometro. In entrambi i casi saranno utilizzati anticorpi policlonali, anti-AGE nel primo caso e anti-MDA (malonildialdeide) nel secondo caso. I saggi Elisa saranno condotti come da protocollo incluso nel prodotto.
La misurazione dei metalli tramite gas-cromatografia e cromatografia liquida associata aspettrometria di massa (Morrow et al. 2005, Pratico et al.2004) permettono di misurare concentrazioni picomolari. Saranno adoperati standard interni ed esterni. Le analisi dei metalli avverranno sia su sangue che sulle urine.
Emocromo e chimica clinica saranno eseguiti dal laboratorio centralizzato del Policlinico Universitario “P.Giaccone”di Palermo.